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2024年3月26日发(作者：switch单掌机是什么意思)
表面微生物监测
除了用空气微生物取样来监测生产环境的微生物污染水平外，表面监测也可监测生产区
域表面以及设备与产品接触表面的微生物世。监测的方法必须考虑取样的准确性和代表性。
基本的监测方法包括接触碟法、擦拭法以及表面冲洗法。每种提供的数据都可以用于 产品质量的评价。测试方法可以定性和定量。而且取样的准确性受收集和处理
样品的过程 影响，因此必须对取样进行培训和测试。
(1)
接触碟法
接触碟容易操作而且可以定量。因此被广泛使用，适用于对平整的规则性表面进行取 样监测。通常的碟子是
50mm
直径的，培养基充满碟子并形成圆顶，取样面
积一般约为
25cm
2
。培养基可以根据使用添加中和剂。取样时，确保全部琼脂表面与取样点表面充分 接触。取样后，需用蘸有
70%
乙醇的纱布擦拭被取样表面，以除去
残留琼脂。将取样后并 做好标记的接触碟置于培养箱中培养，读数，记录。
缺点：不适用于非常规表面；若培养基太湿润，菌落会连片生长导致不易计数。
(2)
擦拭法
该方法通常用于对不规则表面（尤其是设备表面）进行取样。拭子通常为一根棒状 物，其顶端由吸水性材料制成，拭子头在取样前应先行浸湿（通常为无菌生理氣
化钠溶液 或
0. 1%
的蛋白胨溶液约
5ml),
取样时，握住拭子柄，以
30°
角与取样表面接触，缓慢并 充分擦拭，取样面积
25cm
2
左右（可用特定的无菌模板确定擦拭面积），
然后将取样头折 断放入上述溶液内，充分振荡，再用平皿涂布法或铺平板法计数。如果拭子头的材料为藻 酸钙，则要用稀的盐溶液作为稀释剂（如
1%
柠檬酸钠溶液），
这样才能让拭子头完全溶 解。因擦拭取样的面积一般约为
25cm
2
，故擦拭法也属于定量检测方法。
缺点：取样和转移技术可能会影响结果；样品处理后才能培养。
(3)
表面冲洗法
该法适用于监测大面积区域内表面的微生物含菌量，包括设备轨道、储水罐等。用定 量的无菌水冲洗表面，收集淋洗水，用膜过滤法来计算微生物数量。
缺点：适用性不广，需要额外的操作，取样和处理过程可能会影响结果。
D.
人员卫生监测
人员是无菌生产中主要污染源。对于无菌药品的人员要求参见
“4
人员”。
人员卫生监测的方法与表面微生物监测方法中的接触碟法相同。
E.
培养基及培养条件
环境监测用培养基的类型和培养条件取决于所选用的检测方法，但必须具有广谱性。 通常，营养琼脂
（
NA)
或大豆胰蛋白胨琼脂
（
TSA)
培养基属于全能型培养基。
此类培 养基适用于多数环境微生物（包括真菌）的分离生长。但是，对专用于酵母菌分离生长的 特定培养基，仍应另行选择，如玫瑰红钠琼脂、萨布罗
（
Sabourauds)
培养基等都是常用 的真菌培养基。如果被监测环境中使用过消毒剂或存在抗生素，则要向表面监测用培养基 中加一些添加剂（聚山梨酯
80
、卵磷脂、偶氮凝集素或
(3-
内酰胺酶等），以中和或尽量 减少消毒剂或抗生素的抑菌作用。例如，在对非抗生素生产级区环境设施表面监测时，通 常是在营养琼脂或大豆胰蛋白胨琼脂培养基内添
加
0.7%
的聚山梨酯
80
和
0. 1
%的卵 磷脂。
应对环境监测用微生物培养基进行验证，验证其在适当的时间和温度条件下检出真菌
(
包括酵母菌和霉菌）和细菌的能力。
用于环境监控的培养基，首先应检查其可靠地恢复微生物生长的能力。所有配好的培 养基批号，均应进行培养基灵敏度试验，表
14-4
列出了环境监测用培养基灵
敏度检查菌 种。必要时，应使用中和剂，防止洁净室消毒剂或产品残留（如抗生素）抑制微生物生 长。培养基灵敏度检查试验中，可加人环境监测中分离的菌株进行
试验，接种量应不超过
100个菌。
培养基相关的其他内容，参见
“15.6
培养基”。
表14 -4推荐环境监测用培养基灵敏度检查菌种
分类
菌 种
菌株号
CMCC (B) 63 501
CMCC (B) 26 003
CMCC (B) 10 104
箔氧菌
祜草芽孢杆菌(Bacillus suhtUis)
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus
aureus )
铜绿假单胞菌(Pscudomonas
aeruginosa')
环境监测中分离的菌株
ATCC 6633
ATCC 6538
ATCC 9027
厌氧菌
真菌
生抱梭菌(Clostridium
sporogenes)
白色念珠菌（Candida albicans)
黑曲疮(Aspergillus niger )
CMCC (B) 64 941
CMCC (F) 98 001
CMCC (F) 98 003
ATCC 11437
ATCC 18404
ATCC 10231
ATCC 16404
一旦选定培养基，需确定培养温度和培养时间。通常，需氧菌应在
30
培养
48 ~72
小时。酵母菌和霉菌数通常在
20-ZSt,
培养
5~7
天。
F.
监测方法的确认
方法确认的手段包括以下几种。
•
进行回顾性验证
/
确认，即回顾环境监测的历史数据，并对这些监测数据的重现 性予以评价。
參进行挑战性试验，证明监测方法的回收率。该法应用广泛，也可作为回顾性验 证
/
确认的支持性资料。
•
进行监测后取样点的清洁消毒效力测试。
对接触碟法和擦拭法，有时同样需进行方法确认。方法是，将从环境中分离到得代表 性微生物，接种于无菌的试验表面，接种量不超过
100CFU
，然后按常规方法
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