中融合基因阳性和阴性细胞功能学及差异miRNA生物信息学分析

-1328

-安徽医科大学学报

Acta

Universitatis

Medicinalis

Anhii

鸟。?。Dec；55(

12)网络出版时间：2222

-12

-2 13

：43

网络出版地址:https：//Lqs.

cnfi. uet/Lcms/UxWI/34. 1065.

R.24241241.1526.

D3.

htii横纹肌肉瘤中融合基因阳性和阴性细胞功能学

及差异miRNA生物信息学分析王晓萌5李真真"，孟

莲5张海俊5党鸿蔚5李

锋2,刘春霞1摘要

目的

比较横纹肌肉瘤(RMS)融合基因阳性和阴性

融合基因，其恶性程度高，致死率更高［2］o已在成

细胞的生物学行为,结合生物信息学分析差异miRNA,并在

RMS细胞中验证筛选差异mONA的表达。方法

分别利用

肌细胞模型中发现PAX3-COXO1的表达可以促进

RMS的发展［］。因此,全面探索融合基因在RMS

CCKC、Tra/swXi、流式细胞术检测RMS中融合基因阳性

RH3。细胞和融合基因阴性RD及PLA-S40细胞的增殖、侵

袭、迁移和凋亡能力;利用GEO2R分析融合基因阳性和阴性

细胞的差异miRNA；利用Sanger/op绘制差异miRNA火山

图，运用qRT-PCR验证筛选的差异miCNA。结果

RD细胞

的增殖能力高于RH30细胞和PLA-S40细胞(P

<

0

05)。

RH3。细胞的侵袭、迁移和抗凋亡能力高于PLA-S40细胞和

RD细胞(P<4.45)

o火山图结果显示上调miRNA

(红色)

多于下调

miRNA

(绿色"PvaOS)

o

根据

l/p2FCI

>3,P<

0.

05

筛选得到

12

个差异

miRNA(上调

miRNA：miRC、/t-7e-

5p

和

let-7b-Sp,下调

mifNA:

miR--96a-Sn>miRC55-Sn>miR-

21-5p、miR-193a-3p、miR-29b-3p、miR-29a-3p、miRCOO-Sp、

miR-222-3p

和

miR-221-3p)

,

qRT-PCR

检测

12

个差异

miR-

NA的表达，其结果与生物信息学分析结果一致。结论

RMS融合基因阳性细胞的侵袭、迁移、抗凋亡能力高于融合

基因阴性细胞，融合基因阳性与阴性组间差异miRNA为

RMS研究提供新的方向。关键词横纹肌肉瘤;侵袭;迁移;凋亡;miRNA；生物信息学

中图分类号

R

738.6文献标志码A

文章编号1000

-1492(2424)12

-1828

-05

eoi44.17445/j.

cnki.

issnlOOO

-

1490.

2420. 12,

h43横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma,

RM

S

)好发于

儿童及青少年［1］,常见亚型为胚胎性横纹肌肉瘤

(embryonal

RMS,ERMS)、腺泡型横纹肌肉瘤(a/eo-

las

RMS,

ARMS)

,ERMS

发病率约

66%

,

ARMS

发病

率约

2%

；由于

ARMS

中存在

PAX3//AX7-COXO12020

-

07

-

20

接收基金项

目国家自然科学基金(编号：81660441、81960485)作者单位：石河子大学医学院病理学系，石河子8320020首都医科大学附属北京朝阳医院病理科，北京100020作者简介:王晓萌，女，硕士研究生；刘春霞，女，教授，硕士生导师，责任作者，E-maii：

it-

u/u2239@

sina.

com；李

锋，男，教授，博士生导师，责任作者，E-maii：/fexg7555@

120.

com*对本文具有同等贡献

细胞中发挥的作用就显得尤为重要。miRNA作为一种非编码RNA,对癌症的抑制或

表达发挥重要作用。miR-27n等不同miRNA可以

促进RMS侵袭、迁移等生物学行为⑷，但尚未见在

RMS细胞中比较融合基因阳性和阴性的生物学行

为的研究，融合基因和miRNA的相关研究较少。因

此，该文将比较RMS细胞融合基因阳性和阴性的生

物学行为并结合生物信息学分析差异miRNA,为后

续基因及信号通路的研究提供参考。1材料与方法12

细胞系和细胞培养

人RD和PLA-320细胞

系购自中国科学院细胞库；RH36细胞系购自上海

复翔生物技术有限公司；PLA-802、RH36和RD细胞

的培养基为含12%胎牛血清的DMEM培养基(美国

赛默飞公司)，在37

C

15%CO2培养箱中培养。1.2

主要试剂

Celi

Conning

Kit-3购自上海东仁

化学技术有限公司；Total

RNA

Kit、miSchpt H

RT

Kit、miSchpt

SYBR

Green

PCR

Kit

均购自德国

QIA­GEN

公司；Ultra

SYBR

Mixture

(Low

ROX)购自北京

康为世纪公司;TIAN

Schpt

RT

Kit购自北京天根生

物科技公司；Transweli小室购自美国Co/ing

Costor

公司；Annexin

V-CIAC/BI双染细胞凋亡检测试剂盒

购自南京凯基生物有限公司；miRNA引物购自上海

生工生物工程有限公司。1-2方法1.3.1

CCK-3试验

在96孔板中(3

x

W6

个/孔)

接种RMS细胞,分别在0、24、48和72

h,向RMS细

胞中加入CCK-3试剂(12

孔)，并在37

C、5%

CO2的潮湿培养箱中孵育2

ho避光使用BioteX酶

标仪(美国Bio-Ra/

)记录450

nm的吸光度(optical

density,

OD)值。1.

3.

2

Transweli

试验

收集

RMS

细胞(220

以,

25

000个/孔)o侵袭试验需提前2

h在小室内加入

安徽医科大学学报 Ada

Universitatis

Medicinalis

Anhit

2222

Dec;55( 12)-1529

-基质胶，随后更换DMEM培养基水化30

min,无血

QIAzol裂解试剂混匀静置5

min,加入144以三氯

清培养基重悬RMS细胞后置于小室内，将小室置于

22%FBS的600

“I

DMEM培养基的24孔板中孵育

甲烷混匀，室温静置15

min后离心，吸上清液加入

2

5倍体积的无水乙醇混匀后，吸760皿液体加入

2

d,小室用4%多聚甲醛固定20

min后晾干，用

柱子上离心

10

000

r/min,

15

s,4

C。利用

Toil

RNA

Kit试剂盒提取总RNA,将提取miRNA测浓度

0.

1%结晶紫染色15

min后用棉球轻轻擦拭上层，

在显微镜下拍照记录。迁移试验则无需铺基质胶，

在77

°C下孵育24

h后,后续实验步骤同迁移试验。

利用Image

J软件计数和SPSS统计分析。1.3.3

流式细胞术

将细胞铺到6孔板(1xl76

后,试剂盒miScript

H

RT

Kit进行逆转录，联合

SYBR

Green

PCR

KS试剂盒上样后利用7500实时

PCR进行检测，统计分析结果。1.4

统计学处理

使用GraphPad

Prism

7.

0和

SPSS

22分析统计数据。实验均独立重复3次，结果

个/孔)中,2

d后，消化收集RMS细胞，用预冷PBS

洗涤2次，以1

x

106个/ml的浓度重悬于500皿

Bmkmy

Buffer中。向RMS细胞悬液中加入Annexin

均以1

土$表示,检验和F检验分别评估两组及多

组间的差异。P<0.05为差异有统计学意义。VAPC/PI双染试剂各5以。双染后1

h之内利用流

式细胞仪检测凋亡细胞的百分比，并记录凋亡率。1.3.4

差异

miRNA

分析

利用

GEO(http：//pww.

ncbi.

nlm.

nih.

gov/geo/)数据库中

GSE97553

数据

2

结果2.4融合基因阳性RH30细胞的迁移、侵袭能力最

强RMS细胞培养24

h后，统计RH30细胞、RD细

胞和PLA-302细胞的穿孔数量，结果显示RH30细胞

集，包含患者的PAX7-COXO1融合基因阴性细胞(3

株:RD、RH2、RH18)和PAX3-COXO1融合基因阳性

的迁移能力高于RD细胞和PLA-302细胞(F

=

226.

514,P均=.000)o

RMS细胞培养48

h后,统计

RH30细胞和RD细胞、PLA-802细胞的穿孔数量，结

细胞(5

株:RH3、RH4、RH30、RH28、RH41)的

miR­NA

芯片表达谱,运用在线软件GEO2R分析融合基

因阳性和阴性细胞的差异miRNA,

Sa/yerhox分析

果显示RH30细胞的侵袭能力高于RD细胞和PLA-

802

细胞(F=

90.917,

P

均=0.000)。见图

1。差异

miRNA

绘制火山图，I

/p2FC

I

>3,P<0.05,

设定筛选差异miRNA为有意义的阈值。1.3.3

qRT-PCR检测筛选miRNA

RMS细胞铺到

10孔板培养2

d后消化离心，弃上清液，加入700皿

2.2融合基因阴性RD细胞的增殖能力最强

分

析3株RMS细胞在0、24、48和72

h的OD值，并绘

制OD曲线。0

h时RD、RH30和PLA-302细胞

的

图1

3株RMS细胞系的迁移和侵袭能力A：低倍镜下观察3种细胞系的形态xl00；B：3株RMS细胞在迁移实验中穿孔的细胞数量x200；C：3株RMS细胞在侵袭实验中穿孔的细胞数量x

200

；与RH36细胞比较：***

P<

0.

001

-1832

-安徽医科大学学报

Acta

UnaeratatSr

Mefain,nlis

Annus

2022

Dec;55(12)OD值曲线结果显示各组之间无差异(F

=

0.

293

,

P

其中上调miRNA有3个,分别为miR-1、/t-2d-5p和

/t-7b-8p,下调

miRNA

有

9

个,分别为

miR-196a-5p、

>0.

95)o在24、48、72

h时,RD细胞的增殖能力高

于RH30和PLA-C02细胞的增殖能力(F

=

29.

16

,

Prh0

=

0.

004,PplAv02

=0.

000；F

=

109.

729.=

0.

000,

Ppla一802

=

0.

000

；

F

=

56.

749,

PRH34

=

0.

001,

miR-455-3p、miR-21-5p、miR-193a-3p、miR-29b-3p、

miR-29a-3p、miR-100-5p、miR-222-3p

和

miR-221-3p

(表

1)。表1筛选差异miRNAmiRNA表达Pplav02

= 0.

000)

(P

< 0.

05)。此外,RH30

细胞的增

殖能力高于PLA-C02细胞的增殖能力。所有结果差

异均有统计学意义(P<6•65)。见图2omiVNAJPhsp-I4i/-l值3.08E

-03/p/C上调miRNA4.79hsa-/t-7dVphsa-/t-UbVp4.31E

-049.24E

-053.273.28-3.22-3.28-3.25-3.45下调miRNA(nlu

OShsa-i4iR-196a-5phy-mi/V55 Vp1.32E

-052.22E

-02hsa-iciRVl

Vpnsp-mi/-195

a-C

phy-mi/V9b-Cp1.26E-052.15E-058 19E-05寸-3.51-4.43-4.78hy-mi/V9aVp1.n5E-05nsp-mi/-100

Vphs-miRV22

-C

phy-mi/V21

Vp4.19E-056.26E

-06-5.10-5.679.33£-05时间(h)图2

3株细胞系的细胞增殖能力2.4

qRT-PCR验证差异miRNA

在RH30细胞、

PLA-C02细胞、RD细胞中利用qRT-PCR检测筛选

与

RD

细胞比较：*

*

P<0.01,

*** P<0.

001出的12个差异miRNA,结果显示miR-1

(F

=

2.3融合基因阳性RH33细胞的抗凋亡能力最强

28.

908

,

PRD

=

0.

0011

PPLA一802

=

0.

000)

,

let-7d-5p

(

F

=187.

499

,

PRD

=

0.

000.

PPLA.C02

=

0.

000)和

letdb-

在RMS细胞中加入Anoexiv

V

-

APC

/

PI试剂

后检测其凋亡能力，结果显示RH30细胞的凋亡率

低于

RD

细胞和

PLA-C02

细胞(F

=

7.

415

,

Prd

=

0.

015

.Pplav02

=

0.

012)。PLA-C02

细胞与

RD

细胞

5p(F

=

2924.

115,Prd

=0.

OO4,PpLA_co2

=0.

000)在融

合基因阳性RH30细胞中表达高于融合基因阴性

PLA-C02

细胞和

RD

细胞(图

5)；miRV96a-5p(F

=

9&

196

,

PRD

=

0.

000,

PPLA一802

=

0.

001

)

,

miR-455

Vy

(F

=

8.

073

,

PRD

=

0.

047.

PPLAV02

=

0.

440)

,

miR-21-

之间的凋亡率差异无统计学意义(=-0.

040,P

=

0.

27)o

3株RMS细胞中，RH30的抗凋亡能力高于

RD

和

PLAV02。见图

3o5a

(F

=

187.

469,

PRD

=0.

000.

PPLAV02

=

0.

000)

,

miR-

2.4

筛选差异miRNA

GEO2R分析RMS中融合

123a-8p(

F

=

87.

856

,

PRD

=

0.

000,

PPLAV02

=

0.

002),

基因阳性细胞和融合基因阴性细胞中差异miRNA,

miR-29b-3p

(

F

=

16.

142,

-d

=

0.

001,

ppplav02

=

利用saxgereox中火山图分析差异miRNA,红色代表

0.

044),

miRV9aVp

(

F

=

16.573,

PRD

=

0.

447,

PPLAV02

=

0.

002)

,

miRV00Vp

(

F

=

15.

040,

PRD

=

上调miRNA,绿色代表下调miRNA

(图4)。根据

llop2FCI〉3,P<0.05,筛选得到

12

个差异

miRNA,

RH3051o

X

41o

1

31o>A

21o

A

o)

0.

002,PPLAV02

=0.

038)

,miRV22Vp(F

=

53.

230,RDPLA-802Q2

12.42%11

1X

11

50Ql

40

30

9^0

o

□|96.°%vQ2

5.16%Vv

百由

：••¥*：•

*由

■陽1AQ487.4%化」J

百由

(£)<口零舉®11

115

oPQaSEXQHd&UIOupu#SEXddluooPUHsexddluooQ37.42%ooio2

io3

io4

105

Comp-FITC-Ao

io2

io3

io4

io5Comp-FITC-Aoio2

io3

io4

io5Comp-FITC-A图3

3株细胞系的抗凋亡能力与RH34细胞比较：*

P<0.

05

安徽医科大学学报

Acta

Universitatis

Medicinalis

An,nui

2022

Dec;55(

10)Volcano

Plot・1571・细胞的侵袭、迁移和抗凋亡能力高于融合基因阴性

PLA-322细胞和RD细胞，而CCK-3检测结果显示

RD的增殖能力高于RH33和PLA-322,融合基因可能

对RMS细胞的侵袭、迁移及抗凋亡能力起主要作用,

对RMS细胞的增殖能力影响较小，可做进一步研究,

为RMS的分子信号通路研究提供参考。miRNA不仅参与正常的细胞生物进程,在肿瘤

中同样发挥重要的作用。在乳腺癌细胞中过表达

miRNAF44抑制CEP55的表达，抑制乳腺癌细胞的

增殖、侵袭和迁移［6］o在RMS中，融合基因不仅影

图4火山图分析差异miRNA红色:上调miRNA；绿色:下调miRNA；黑色:无统计学意义Prd

=

2.

002,

Pplac02

=

2.

027

）和

miR-221-3p

（

F

=

45.

550,Prd

=

2.

002,Pplac02

=

2.

027）在融合基因阴

性RD细胞和PLA-322细胞中表达高于融合基因阳

性RH36细胞（图5）

o上述结果与生物信息学分析

结果一致。图5

qRT-PCR分析筛选差异miRNA的mRNA表达1 :

miS-5

;

2:

1et-7U-8p;

3

：

letCbCp

;4

: miRCOOCp;

5

: miS-21

Cp;

6

:miRC9bCp ;7

:

miRC22Cp;

2

:

miRC55Cp;

9

:

miRC93Cp;

12:

miS-

29aCp；11:

miRC96Cp；12：miRC21Cp；与

RH36

细胞比较：*

P

<

2.

25,

**

P<2.

21,…P<2.

0213讨论ARMS

中

75%

〜82%存在

t（2；13）

（q36；ql4）/

PAX7-POXO1

或

t（1；

13）（p36；

ql4）//AX7-FOXO1

易位,寸RMS的发生发展起重要作用⑸。Williamson

ct

a/6在214位RMS患者中运用Ka/lan

-

Meice分

析无病生存率和总体生存率，结果显示融合基因阳性

RMS患者的转移比例高于融合基因阴性的RMS患

者,融合基因阳性患者比融合基因阴性患者预后差。

本文在RMS细胞学水平证实,融合基因阳性RH33

响肿瘤细胞的生物学功能，对miRNA同样发挥重要

作用，过表达PAX3-FOXO1激活促进miRF56Fp的

表达，进而促进ARMS的发展⑻。本研究利用生物信息学分析miRNA芯片表达谱

筛选RMS融合基因阳性和阴性的差异miRNA并利

用

qRT-PCR

证实

miRC96a-5p、miR-455Cp、miR-

193aCp、miRC02Cp、miR-222Cp

和

miR-221-3p

等在

RMS融合基因阳性中的表达低于融合基因阴性的

RMS,在RMS融合基因阳性中可能发挥抑制作用。Zhan

ct

ai［9］发现在胰腺癌中miR4554p表达

降低,PDZ结合基序（TAZ）为Hippo途径的关键因

子,过表达miR4554p靶向抑制TAZ表达抑制胰腺

癌细胞的增殖。Mohamed

ct

a-［12］研究表明在RMS

中TAZ促进RD（ERMS）细胞的增殖及成肌细胞转

化。Ln

ct

ai［11］发现在耐西妥昔单抗的大肠癌中

miR-142

过表达‘lncRNA

MIR142HG

可以驱动

miR-

142和miR425b协调抑制Wat信号通路的负调控

因子，增强Wat信号表达导致耐药,不利于肿瘤的

治疗。Singh

X

a-［12］在p57和c-fos双突变表达降低

的小鼠模型体内发现，与正常成肌细胞相比,ERMS

中的Wat信号通路被下调。Xu

ct

/⑶研究表明

miR-196a-5p

是唯一连接

LOC134466

和

TAC1

的

miRNA,过表达

LOC134466

可抑制

miR-196a-5p,促

进TAC1的表达，抑制子宫内膜癌细胞的增殖。

Wang

ct

a/-］在肝癌中利用生物信息学分析及实验

证实miR-221-3n/miR-222-3n高表达，其预测靶基

因CBFB、UBE2N在肝癌预后预测表现良好,可能是

肝癌预后的指标。本研究miR-221-3n/miR-222-3n

等miRNA在RMS融合基因阴性的表达高于融合基

因阳性，上述研究为RMS中研究差异miRNA提供

参考,可利用miRNA做进一步研究。综上，融合基因阳性的RMS细胞侵袭、迁移和

抗凋亡能力高于融合基因阴性RMS细胞，融合基因

对差异miRNA的表达可能起重要作用，这为深入研

究融合基因在RMS的分子作用机制及靶向药物的

-1334

-安徽医科大学学报

Acta

Universitatis

Medicinalis

Anhii

2222

Dec；55(

12)CEP55[J].

Cancer

BSi

Thes,

2015,

19(4)：

306

-

15.[5

]

Hanna

J

A,

Garcia

M

R,

La/eonois

A,

et

a/

PAX5-FOXO1

研究奠定基础。参考文献[1

]

Jp

VY,

F/whes

C

D.

WHO

classifica/on

pf

soft

tissue

tumonrs:

an

upPate baseX

on

the

2013

(4th)

eXitWn[J].

PaWo/gy,

2014,

dhves

miRC86-5p

ank

represses

miS-421

contibu/ng

to

pathe-

geoesis

ef

alveolar

/abbomyosarcoma

[J].

Oncogexe,

2011,

57

(15)

:

1991

-2007.[9

]

Zhan

T,

Huang

X,

Tian

X,

et

ai.

Downreoulation

ef

microRNA-

455-5p

ISCs

to

py/fe/tWp

ank

drup

resistance

ef

pancreatic

46(2)

:

95

-104i[2]

La

Starzo

R,

Nofrini

V

,

Piehni T,

et

ai.

McOechlas

cyWoexe/cs

cancer

celis

viv

taryeting

TAZ

[

J ].

Mol

Thes

Nuc/ic

AciSs,

2015,

10：215

-20.[12]

MoPameX

A,

Sun

C,

De

MX/

V,

et

a/

The

Hippe effecter

TAZ

detect

an uukalanceX

t(2

jd)

(q36；ql4)

and

PAX7-FOXO1

fu­sion

in

/abbomyosarcoma

with

mixeX

emb/onai/alveolar

features

[J].

Pe/iaw

BlooP

Cancer,

2015,

62(12)

：2233

-41.(WWTR1)

transforms

myoPlasts

and

TAZ

abunkance is associate/

with

reOuceX

survivai

in

emb/onai

/abbomyosarcoma

[

J

].

J

[3]

Pankep

P

R,

Chatte/ee

B,

OlanicO

M E

,

et

a/

PAX7-FOXO1

is

essential

fps tumons initiation

and

maintenance

but

net

/cy2exce

in

a

human

myoPlast

moPel

ef

/abbomyosa/oma

[

J

].

J

Pathoi:

Pathoi,

2012,

200(1)

：

3

-14.[11] Lu

Y,

Zhae

X,

Lin

Q,

et

ai.

IncRNA

MIA170HG-2ehveX

miR-

2017,201(5) ：620

-37.120

ank

miR-125b

me/iate

cetuximab

resistance

viv

WnWLeW-

[4]

Tombolan

L,

Zampini

M,

Casara

S,

eta/

MicroRNA-47a

contiS-

catexin

WgnalSg]

J].

Nat

MeV,

2017

,

23

(11)

:

1551 -

41.[12] Singh S,

Vinson

C,

Gur/p

C

M,

et

ai.

ImpaireV

Wnt

signa/ng in

utes

to

/abbomyosa/oma

celi

p//fe/tWp

by

suppressing

RARA

ank

RXRA[J].

PLoP

One,

2015,

10(4)

:

e0125171.[5]

OlanicO

M

E,

Bars

FG.

A

cab

to

ARMS:

taryeting

the

PAX5-

embryonai

rnabbomyosarcoma

celis from

p53/c-fes

donUIe

mutant

mSe[J].

Am

J

Pathoi,

2010,

177(4)：

2055

-1

gene

in

alveolar

/abdomyosarcoma

[

J

].

Expert

Opin

Thes

Taryets,

2013

,

17

(5)

：

607

- 23.[15

]

Xu

H,

Sun

Y,

Ma

Z,

et

ai.

LOC134466

methylation promotes

on-

cooevesis

ef

evkomeWiai

carcinoma

throuph

LOC134466/nsa-miR-

[6

]

Williamson

D,

Missiaglio

E

,

DeRA,

eta/

Fusion

gexe-Fevativa

176a-5p/PAC1

aXs[J].

AgSg,

2015,

10(11)

:

3353

-70.[14]

Wang

X,

Liae

X,

Huang

K,

et ai.

ClustereV

microRNAs

hsa-alveolar

rnabbomyosarcoma

is

clinicaliy

ank

mcOeculahy

inkis/n-

guisUanie

eom

emb/onai

rnabbomyosarcoma

[

J

].

J

Clin

Oncol:

miR-221-3p/asa-miR-222-3p

ank

their

taryeteO

genes

might

be

proonostic

preVictors

fer

hepaWceOulas carcinoma[

J].

J

Cancer,

2012,

25(13)

:

2151

-5.[7

]

Yin

Y,

Cai

J,

Meng

F,

et ai.

MiS-144

suppresses

p//fe//op,2019,

10(11)

:

2520

-on,

and

mio/tion

ef

breast

cancer

celis

Wrouph

inkibitingFunctional

and

differerhal

miRNA

bioinformahep

analysip

of

fusion

gere

positive

and

neyahve

cells

in

rhabdomyssprccmaWang

Xiaomeng,

Li

Zhoizhen,

Meng

Linn,

X

ai(Deni

of

Pathology,

School

o/

Medicinr,

ShiVezt

Uhtfitp,

ShiVezt

632002)Abstrcct

Objective

To

compare

tha

11010X100-

beOnvioz

between

rnabdomyosarcamn

(RMS)

fusion

gevo

pos/iva

ank

nepativa

cells:

analyao

diRereotial

miRNAs

of

RMS

fusion

gevo

positiva

ank

nepativa

using

bioinformaticr:

ank

yoify

tha

expression

of

diherential

miRNAs.

Methodi

Tha

viabilito,

invasion,

migration

ank

dpopto/c

canncity

of

fusion

gevo

positiva

RH34

cells

ank

fusion

gevo

nepa/va

RD

ank

PLA-502

calls

in

RMS

were

detecteX

by

CCK-3,

Transweli,

ank

Uow

cytomX/,

/spectWXy.

GEO2R

wns

use/

ta

analyao

tha

diherential

miRNA

of

tha

Uision

gevo

positiva

ank

nepativa

cXis.

SangerVox

wns

use/

ta

analyoo

diherential

miRNAs

ank

mabo

Volcyqo

m/.

qRT-PCR

wns

use/

ta

aUfy

tha

selecteV

diherential

miRNAs.

Resultu

Tha

proliferation

ability

of

RD

cells

wns

highoe

thnn

thnt

of

RH34

cells

and

PLA-502

cells

(P

<0.

05)

.

Tha

invasion,

migra/on

ank

anti-anopw/c

ability

of

RH34

cells

were

highoe

thnn

those

of

PLA-502

cells

ank

RD

cells

(P

<0.

05)

.

Vo/ono

plot

results

sPoweV

thnt

tha

nnmboz

ch

up-repulate/

miRNAs

wns

more

thnn

down-repulate/

miRNAs

(P

<0.

05)

.

Accor/ing

ta

I

log2FC

I

>3

,

P

<0.

05

,

17

dihereotiai

miRNAs

were

screeoeV

(

up-repulate/

miRNAs

containe/

miR-1,

let-8d-8p

ank

let-7b-8p,

down-

repulate/

miRNAs

containe/ miR-196nCp,

miR-255-3p,

miR-21-Sp,

miR-173n-3p,

miR-29b-3p, miR-29n-fp,

miRC70Cp,

miR-222Cp

ank

miR

-221

Cp)

,

and

qRT-PCR

results

were

cansistev-

with

0X10/10、-

£11/^[.

Conclusion

Tha

ability

of

invasion,

migration

ank

resistant

apoptosis

in

RMS

fusion

aeoopositWa

colis

is

highoethnn

thnt

of

fusion

uene-pepativa

cXis.

Tha

diherential/

expresseV

miRNAs

between

fusion

gevo

positiva

ank

nepn-

tiva

groups

con

provibo

new

directions

foe

RMS

research3Key

wods

Udbdomyosdcomn

：

invasion,

migration; apoptosis:

miRNA

；

bioinformatic