IGFBP3通过癌旁脂肪细胞促进肾癌细胞生长与转移的作用研究

现物医学biomecLcnjournals«com Progress in Modem Biomedicine VoL21 NO«3 FEB*2021• 407 •doi: 10.13241/.2021.03.002IGFBP3通过癌旁脂肪细胞促进肾癌细胞生长与转移的作用研究*沈梦君1董凯2韩厦1赵宇阳1徐东亮UA(1上海交通大学附属第一人民医院泌尿外科上海200080;2海军军医大学上海200433;3海军军医大学附属长征医院泌尿外科上海200003)摘要目的:探讨肾透明细胞癌的分泌蛋白丨GFBP3对癌旁脂肪细胞分化的作用及通过脂肪细胞促进肾透明癌细胞生长与转移的

作用。方法:通过肾细胞癌的基因数据库发现过表达的基因IGFBP3,免疫组化和RT-PCR确认IGFBP3在标本中的表达.RT-PCR

和Western Blot检测丨GFBP3对脂肪细胞分化成熟特征标志物表达的影响。以过表达1GFBP3的786-0细胞为模型，Western Blot

检测IGFBP3的促脂肪细胞分化作用与TGFp-smadl/5/8及TGFp-p38MAPK信号通路的关系。将过表达IGFBP3的786-0细胞

与脂肪细胞共培养得到条件培养基，通过油红染色检测条件培养的肾癌细胞中脂滴含量，迁移实验和CCK8实验分别检测脂肪

细胞对肾癌细胞侵袭性及增殖的影响结果：相较于正常组，肾癌标本中IGFBP3的表达增加(户=0.0丨7)。《^8?3使脂肪细胞分化

成熟相关标志物PPAR7、PGCla、c/EBPa、Prdml6、UCPl表达增加。以丨GFBP3处理脂肪细胞时，可以增加TGF(3下游蛋白表达

水平，30 min后p-smadl/5/8表达增加(P=0.024),60 min后p-p38MAPK表达明显增加(P=0.013);,条件培养后的786-0细胞内的脂

滴形成增加〇P=〇.〇28),脂肪细胞促进786-0细胞的增殖和迁移能力。结论:IGFBP3是肾透明细胞癌中过度表达的蛋白，能够促进

前脂肪细胞分化，其机制主要通过激活TGFp通路中的smadl/5/8、p38MAPIC。成熟的脂肪细胞能够促进肾癌细胞质脂滴形成，并

且促进肿瘤的增殖、提高肿瘤的侵袭性。关键词:IGFBP3;脂代谢;脂肪细胞；肾细胞癌中图分类号:R-33; 文献标识码：A文章编号：1673-6273(2021 )03-407-07IGFBP3 Enhances Proliferation and Migration Capability of Renal

Carcinoma Cell via Adjacent Adipocytes*SHENMeng-jun1，DONG Kaf，HANSha1，ZHAO Yu-yang1，XUDong-liangUA

(1 Department of Urology, Shanghai General Hospital, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, Shanghai, 200080, China;2 Second Military Medical University, Shanghai, 200433, China; 3 Department of Urology, Changzheng Hospital, Second MilitaryMedical University, Shanghai, 200003, China)ABSTRACT Objective: To investigate the mechanisms of IGFBP3 in the action on adjacent adipocytes and the effect of adjacent

adipocytes on the proliferation and migration capability of clear cell renal cell carcinoma (ccRCC). Methods: IGFBP3 was found to be

overexpressed in the database of ccRCC, which was verified in the specimen of ccRCC. RT-PCR and Western Blot were used to detected

the biomarkers of adipocytes. Renal carcinoma cell line 786-0 cell overexpressing IGFBP3 was used as cellular model and western blot

was used to detect the effect of IGFBP3 on TGFp-smad 1/5/8 and TGF p-p38MAPKpathway. Conditioned medium was prepared via

cocultivation of 786-0 overexpressing IGFBP3 and preadipocytes. Oil red staining was used to detect the contents of lipid droplets in re­nal carcinoma cell. Transwell and CCK8 was used to detect the effect of adipocytes on migration capability and proliferation of renal car­cinoma cell. Results: The expression of IGFBP3 markedly increased in the specimen of renal cell carcinoma (P=0.017). IGFBP3 promoted

the differentiation of preadipocyte after activating smadl/5/8 (P=0.024) and p38MAPK (P=0.013). The contents of lipid droplets in­creased in 786-0 cell cultivated in the conditioned medium (P=0.028) and migration capability and proliferation of 786-0 were promoted.

Conclusions: IGFBP3, overexpressed in renal cell carcinoma, promoted the expression of preadipocyte by activating smadl/5/8 and

p38MAPK. Mature adipocytes could increase the contents of lipid droplets and promoted migration capability and proliferation of renal

cell ds: IGFBP3; Lipid metabolism; Adipocyte; Renal cell carcinoma

Chinese Library Classification (CLC): R-33; Document code: A

Article ID: 1673-6273(2021)03-407-07*基金项目：申康医院研究发展中心基金项目(SHDC12014215)作者简介:沈梦君（1994-)，男，硕士研究生，主要研究方向：肾癌，E-mail: mjshl 123@通讯作者:徐东亮（1976-)，男，博士生导师，教授，主要研究方向：肾癌，E-mail: urologistdlx@，电话：139****9767(收稿日期:2020-05-31接受日期：2020-06-26)

• 408 •现物医学 Progress in Modem Biomedicine VoL21 NO>3 FEB>2021抗体、pSmadl/5/8 抗体、Smadl/5/8 抗体、p-P38 MAPK 抗体、

刖目肾细胞癌位于男性肿瘤的第6位，其死亡率为5.6/10万％

肾透明癌细胞(clear cell renal cell carcinoma, ccRCC)是肾细胞

癌的最常见病理类型PI，患者希佩尔-林道基因(Von-Hip-

pel-Lindau，VHL)大多表达异常，导致低氧诱导因子(hypoxia in­ducible factor, HIF)的堆积 ，从而弓| 起 cyclinDl 、EGFR、TGF〇i

等时上调。针对pVHL-HIF-VEGF通路的药物已成为一线治疗

方案[M1,但目前可供选择的药物较少，且存在脱靶和耐药的问

题19#。脂肪细胞与肿瘤细胞之间有着许多重要联系，包括供

能、抗凋亡、通过旁分泌途径促进成瘤或血管生成等_21。目前

已证实肥胖是肾细胞癌的危险因素但仍缺乏肾周脂肪的

相关研究。通过Oncomine数据库的分析发现IGFBP3在ccRCC中

高表达。临床研究发现患者存在不同基因型的IGFBP3，AA型

的患者具有更高的肾细胞癌患病风险，同时发现AA型基因与

病理分期有关〜61。鉴于IGFBP3能够促进棕色脂肪细胞的生

长和分化1171,本次研究发现肾透明细胞癌过度表达IGFBP3,并

通过IGFBP3促进癌旁脂肪细胞分化，进而由成熟的脂肪细胞

促进肾癌细胞的生长与转移，结果报告如下。P38 MAPK抗体、p-actin抗体、UCP1抗体购自美国Cell Sig­naling Technology 公司，LDN-193189、SB431542 购自美国 Sell-

eck Chemicals,油红染色试剂盒购自上海想康生物科技有限公

司，引物、甲醇、氯仿、无水乙醇、异丙醇购自上海Sango

Biotech，30 %丙烯酰胺、过硫酸铵、TEMED、Tween 20、CCK8

试剂盒购自上海碧云天公司，RT-PCR试剂盒购自美国Thermo

Rsher Scientific公司，免疫组化试剂盒购自陕西普罗安蒂生物

科技发展有限公司。PCR仪购自美国Thermo Fisher Scientific

公司，Transwell小室购自美国康宁公司，酶标仪购自美国

Bio-Rad 公司。1.2方法1.2.1免疫组化使用免疫组化Elivision二步法检测IGFBP3

的表达。将切片脱蜡、水化，用PBS冲洗。对组织抗原进行修

复。加50 (xL的3 %双氧水，室温下孵育10 min。PBS冲洗后加

人50 pL封闭液，室温孵育30 min。除去封闭液，加50 jxL

IGFBP3抗体，室温下孵育60 min。PBS冲洗，加50 pL聚合物

增强剂，室温下孵育约20 min, PBS冲洗3次，每次约5 min,

加50 (xL酶标抗体，室温下孵育20 min。PBS冲洗，加人50 |xL

新鲜配制的DAB溶液，显微镜观察10 min,当出现棕色染色而

背景无着色时终止反应。用水冲洗,苏木素复染。1.2.2油红染色取目的细胞进行涂片，自然干燥后，将准备

好的细胞涂片置于配制好的油红染液工作液中，染色约10 min,

用37 C预热的双蒸水洗涤约15 s;可以不用等待涂片上的水

完全干，用试剂盒中的水溶性封固液进行封片;镜检观察:组织

中的脂肪可被染成红色，细胞核可被染成蓝色。1.2.3总RNA提取、逆转录-聚合酶链反应对于组织，切取

约25 g,加人TRIZOL试剂1 mL,然后使用组织强力均质机使

其均质化;对于细胞,6孔板中加入TRIZOL试剂1 mL,并通过

移液枪抽吸拍打几次促进细胞的裂解。提取样品中的RNA，溶

解RNA并检测其浓度。根据RT-PCR试剂盒配制反应体系，逆

转录得到目的cDNA,于-20°C保存。根据相关基因的cDNA

序列设计引物：1材料与方法1.1材料1.1.1实验动物人肾癌细胞系786-0由上海交通大学附属

第一人民医院泌尿外科研究所提供。C57BL/6小鼠(6-7 w)购

于上海杰思捷实验动物有限公司。1.1.2组织标本选取2017年12月至2018年5月的手术标

本28例，经术后病理证实，14例为肾透明细胞癌患者，14例为

肾囊肿患者，分别取肿瘤组织和正常肾组织，脂肪组织选取周

围脂肪组织和远端(腹膜)脂肪组织。1.1.3实验试剂及仪器 合成h-IGFBP3单体、T3、Insulin、DEX、IBMX、卩引嗓美辛购自美国Sigma-Aldrich公司，过表达

1GFBP3慢病毒载体购自上海纽恩生物科技有限公司，】GFBP3表1引物序列Table 1 Primer sequences in this study

Genes Names

IGFBP3

PPARy

PGCla

c/EBPa

Prdml6

UCP1

36b4Forward primersCCAGGAAACATCAGTGAGTCC

CTCCAAGAATACCAAAGTGCGA

TATGGAGTGACATAGAGTGTGCT

CAAGAACAGCAACGAGTACCG

CCAAGGCAAGGGCGAAGAA

AGGCTTCCAGTACCATTAGGT

AGATTCGGGA

丁 ATGC

丁GTTGGC

Reverse primersGGATGGAACTTGGAATCGGTCAGCCTGATGCTTTATCCCCACACCACTTCAATCCACCCAGAAAGGTCACTGGTCAACTCCAGCACAGTCTGGTGGGATTGGAATGTCTGAGTGAGGCAAAGCTGATTTTCGGGTCCTAGACCAGTGTTC完成定量PCR后,得到各基因的CT值，其中以稳定表达

的基因36b4为内参基因，计算各基因表达情况。1.2.4分离小鼠原代棕色脂肪及其培养 选取6-7周的

C57BL/6小鼠。无菌条件下取下小鼠肩胛部棕色脂肪,放人培养皿中，清洗3次。充分剪碎组织，放人消化液中消化。将消化

液过滤后，以1800 ipm离心5 min,弃去上清，加人DMEM培

养基（20 % FBS)制成细胞悬液。取少量细胞悬液，计数，调节

细胞密度。1〇4密度接种于培养皿中，以DMEM培养基（20%

现代生物医学进展 Progress in Modem Biomedicine Voi21 NO>3 FEB<2021.409 •FBS)培养至汇合成层(记为第0天）。第〇天起加人含不同剂量IGFBP3的诱导剂，（1)实验组

为 DMEM 培养基 + 20 % FBS + 1 nM T3 + 20 nM + 5 M DEX

+ 0.5 mM IBMX + 250、500、1000 ng/ml rhIGFBP3, (2)阴性对

照组为 DMEM 培养基 + 20 % FBS + 1 nM T3 + 20 nM insulin+5 M DEX + 0.5 mM IBMX, (3)阳性对照组为DMEM培养基+

20 % FBS + 1 nM T3 + 20 nM insulin+ 5 M DEX + 0.5 mM IB-

MX +0.125 M吲哚美辛。2天后换液，将培养基改为DMEM

培养基 + 20 % FBS + 1 nM T3 + 20 nM insulin。之后，每隔 2 天

为细胞换一次液,直至第10天。分别于0 d、2 d、4 d、8 d、10 d显

微镜下观察胞质内脂滴的大小和数量，使用酶标仪行定量分析。

1.2.5慢病毒感染肾癌细胞提前1天将培养状态良好的

786-0接种于24孔板，细胞密度为lOVmL,保证第2天肾癌细

胞的细胞汇合率能达50 %左右。移去肾癌细胞的培养基，加人6 (xg/mL Polybrene 0.5 mL,可促进慢病毒的感染。从-80 °C冰

箱中取出慢病毒，先置于冰上慢慢融化,弃去细胞原有培养基

并加入250 |xL混有病毒原液的培养基。后持续感染4 h，4 h后

再加人250 pL该培养液。选用3 pg/mL的嗓呤霉素进行筛

选。每3天更换1次含有嘌呤霉素的完全培养基，直到没有感

染的对照组细胞被完全杀死。传代筛选后的细胞，过程中继续

使用嘌呤霉素，在连续传代3次后可进行冻存。1.2.6 Transwel丨实验 选取病毒转染的786-0细胞，WesternBlot定量检测转染细胞培养基中的IGFBP3蛋白水平。将肾癌

细胞和脂肪细胞进行共培养，上层细胞为原代棕色脂肪细胞，

下层细胞为对照组细胞(空载）、单独的肾癌细胞、过表达IGF-

BP3的肾癌细胞、过表达IGFBP3的肾癌细胞+ IGFBP3的中

和抗体。检测实验组和对照组中PPAR~y、PGCla、c/EBPa、

Prdml6、UCP1 的 mRNA 水平。Western Blot 定量分析 UCP1 的

蛋白水平。分别于〇(1、2(1、4(1、8<1、10(1显微镜下监测胞质内

脂滴情况。 ，共分4个实验组,A组为过表达IGFBP3的786-0细胞+脂肪

细胞,B组为786-0细胞+脂肪细胞，C组为过表达IGFBP3的

786-0细胞,D组为786-0细胞。肾癌细胞经过条件培养基培

养后行迁移实验:用胰酶消化786-0细胞，充分消化后离心，可

见细胞分层，去除上清液。四组细胞需要用不同的条件培养液

稀释,细胞密度约为5x 1〇4个/mL。接着取IOOjjlL细胞悬液置

于小室内培养。下室放置完全培养基，注意小室与下层培养板

之间不能留气泡。将细胞置于培养箱内培养48 h。取出小室，去

除小室内的培养液后，用PBS清洗2遍，甲醛固定20 min，等待

其风干。结晶紫染色20 min,再去除上层未发生迁移的细胞，最

后用无菌的PBS冲洗3遍。1.2.7 CCK8实验将处于对数生长期的786-0细胞加人24

孔板中。与迁移实验相同，细胞共分成4个实验组，每组细胞有

3个复孔。将其置人37 X： ,5 % C02的培养箱培养，细胞处理后

应每天在同一时间点进行观察。检测时，将CCK-8和PBS的混

合溶液加人到各孔中。孵育2 h后，用酶标仪(波长450 nm)测

定每孔的吸光度值，最后绘制细胞生长曲线。1.3统计方法采用GraphPad Prism 7.0对实验数据进行统计分析，采用

平均数±标准差(mean± SD)表示。若两组间差异性比较，采用

独立样本t检验,P<0.05认为两者差异具有统计学意义。2结果2.1 IGFBP3在肿瘤标本中表达增加免疫组化的结果显示肿瘤组的肾癌细胞相较于正常细胞

IGFBP3表达增加(户0.017,图1A)。RT-PCR检测结果显示肿

瘤组织中IGFBP3的基因表达增加（图1B)。对于棕色脂肪细胞

标志物UCP1的检测，无论与非肿瘤组比较还是与远端脂肪组

织比较，肿瘤周围脂肪组织都有UCP1的表达增加(P<0.001,

图1C、D),表明癌旁脂肪组织中表达UCP1的成熟棕色脂肪细

胞增加。通过共培养可以得到条件培养基，根据条件培养液的不同AP<0.001->(V6i d

i Z: *TumorNormalcco

«»lw»

J

P< 0.001DA 0.001Mo»«AU(«

l0:•d图1 IGFBP3和UCP1在标本中的表达

Fig. 1 Expression of 1GFBP3 and UCP1 in the specimen

• 410 •现代半物疾学讲展 Progress in Modern Biomedicine VoL21 NO*3 FEB«2021依赖性，随着剂量的增加，IGFBP3的促分化作用也随之提高，

但当剂量达到500 ng/mL后，这种效应也减少。分别于0 d、2 d、

4d、8d、10d这几个不同时间段，观察脂肪内的脂滴含量，通

过油红染色我们发现在加人丨GFBP3或吲哚美辛后，分化成熟

的脂肪细胞脂滴含量增加，这种变化在脂肪细胞分化的第8天

最为明显。在第10天，通过Western Blot分析发现IGFBP3使

棕色脂肪的标志物UCP1表达增加(见图2C),表明IGFBP3能

够使脂肪细胞的成熟分化相关标志物表达增加。2.2 IGFBP3体外促进棕色前脂肪细胞分化我们主要选取小鼠的原代脂肪细胞,实验组中加人不同剂

量的(250、500、1000 ng/mL),而阳性对照组中加人已明确有促

脂肪细胞分化的吲哚美辛。在分化第1〇天对棕色脂肪相关基

因检测（见图2A),发现相较于阴性对照组，加人IGFBP3或吲

哚美辛后卩?八117、？〇(：1£1、<;疋8?〇(的1111^八水平明显较高，包

括棕色脂肪细胞的特征性标志物Prdml6、UCP1，两者也有明

显差异。除此之外，根据图2B，IGFBP3的效应存在明显的剂量|*1 * * *

CUCP1B-actin"/ //貪 *

/// //*control 250IGFBP3blLi图2 IGFBP3在体外能够促进棕色脂肪细胞的分化

Fig.2 IGFBP3 promoted differentiation of brown adipocytes in vitroNotes: Data were expressed as mean ± SD, *尸<0.05, compared with the control group; BP3 represents IGFBP3; indo represents indometacin.2.3 IGFBP3可由肾癌细胞分泌促进脂肪细胞分化通过transwell实验将肾癌细胞与脂肪细胞共培养，模拟

IGFBP3有肾癌细胞分泌作用于脂肪细胞的过程。图3A中可

以看到构建的基因重组细胞系过度表达IGFBP3。在图3B中，

与过表达丨GFBP3共培养的脂肪细胞PPAR7、PGCla、c/EBPa

的mRNA水平明显较高，同时棕色脂肪细胞的特征性标志物

Prdml6、UCPl也明显升高,而对照组细胞并没有类似的效应。

再加人IGFBP3的中和抗体后，可以明显看到相关基因的表达

明显调低。分别于0 d、2 d、4 d、8 d、10 d这几个不同时间段(见

图3C)，观察脂肪内的脂滴含量，在8 d时过表达IGFBP3组的

脂肪细胞内的脂滴含量明显升高，而加人中和抗体后细胞内脂

滴含量降低。在图3D中，作为棕色脂肪的标志物UCP1也在过

表达IGFBP3的肾癌细胞的作用下表达增加，而且与其他组相

比有明显差异。因此，过表达K3FBP3的肾癌细胞能够使脂肪

细胞分化成熟特征性标志物升高，并提高脂肪细胞内脂滴含

量。2.4 IGFBP3 激活 TGFp 通路图4A中，加人IGFBP3后30 min时p-smadl/5/8的表达开始明显增加；同样地，图4C中，加人IGFBP3后60 min时

p-p38MAPK的表达开始明显增力D(P=0.013)。可见IGFBP3能

够激活TGFp的下游通路，从而促进脂肪细胞的分化。在加入

相应的TGFp抑制剂，结果显示着这种效应可以被阻断，说明

IGFBP3通过TGFp通路作用于下游的smadl/5/8、p38MAPK。

定量分析(图4B、D)发现在开始反应后30 min起，p-smadl/5/8

(P=0.024)和 p-p38MAPK(P=0.033)的表达量相较于 0 min 时存

在明显统计学差异。2.5脂肪细胞促进肾癌细胞的增殖和侵袭图5显示过表达IGFBP3的786-0细胞与脂肪细胞共培

养后，其条件培养基处理后的肾癌细胞脂滴明显多于其他3

组。空载的786-0并没有相同的作用(P=0.028),说明IGFBP3

对脂肪细胞的作用在其中起到关键性作用，但相较于其它两组

仍有上升趋势，说明脂肪细胞对肾癌细胞形成脂滴有一定的作

用。786-0细胞本身具有一定侵袭性,但是图6A、B显示在脂肪

细胞的作用下，迁移的肾癌细胞的数量高于其他两组，尤其是

在过表达IGFBP3的肾癌细胞作用后。细胞计数后发现该组的

肾癌细胞的迁移数量与对照组相比有显著性差异。图4C中过

现学biomecLcnjournals^om Progress in Modern Biomedicine VoL21 NO*3 FEB*2021• 411 •表达IGFBP3的共培养组的存活细胞数明显高于其他三组，可见脂肪细胞对肾癌细胞增殖的促进作用。图3由肾癌细胞分泌的IGFBP3能够促进脂肪细胞分化

Fig.3 IGFBP3 secreted by renal carcinoma cell promotes differentiation of adipocytes

Notes: Data were expressed as mean

士 SD，*尸<0.05, compared with the control group; OV represented overexpression; Ab represented antibody (min)0 15 30 60 90 0 15 30 60 90P-smadl/5/8Total smadl/5/8IGFBP3

十LDN-193189

十CTim© (min)0 15 30 60 90 0 15 30 60 90P- p38 MAPK■■■■■■Total p38MAPK麟典應••雜••感壽I6FBP3SB431542 +Time (min)图4 IGFBP3激活TGFp通路Fig.4 IGFBP3 activated TGFp pathwayNotes: Data were expressed as mean ± SD, *P<0.05, compared with 0 min; LDN-193189 was the inhibitor of smad 1/5/8; SB431542 was the inhibitor ofp38MAPK.3讨论细胞提供脂肪酸，而肿瘤细胞通过脂肪酸氧化获取能量。本研

究中，我们对IGFBP3对前脂肪细胞分化的作用进行检测，发

对于某些肿瘤来说，脂肪细胞是肿瘤发生发展的重要微环

现IGFBP3的促分化作用，推测IGFBP3通过增加成熟的脂肪

境，目前发现的主要有乳腺癌和腹腔转移瘤，如卵巢癌、结肠癌

细胞促进肿瘤的进展。等除了本身可以分泌信号分子，脂肪细胞还促进肿瘤的迁

脂肪细胞分化是一个复杂的过程,PPAR7是其中最重要

移、粘附等，与肿瘤细胞进行能量物质的交换。脂肪细胞为肿瘤的调节因子，能与C/EBP发挥协调作用使脂肪细胞保持其正

• 412 •现物医学 Progress in Modern Biomedicine VoL21 NO*3 FEB»2021

常的基因表达l2〇M。基于IGFBP3下游通路的探索，Nguyen等m

80.0.认为K3FBP3可能与脂肪细胞的分化有关。在对白色脂肪细胞

60.

0.系3T3-L1的研究中，IGFBP3与PPAR7反应元件结合，从而阻

Oou断下游通路，最终抑制3T3-L1的分化气HasamhiCM等发现

(oqjIGFBP3能够调节3T3-L1对TGFp的敏感性，进而增强Smad

o0>q.4o

.2通路对脂肪细胞分化的抑制作用。而在原代棕色脂肪细胞中的

0比研究发现IGFBP3能够促进棕色脂肪细胞的生长和分化m。本

0次研究结果显示外源的IGFBP3在浓度达到500 ng/mL时，相

较于对照组有较明显的促分化，胞内脂滴含量增加，这种作用

在前脂肪细胞分化的第8天最为显著。所以IGFBP3与脂肪细

胞分化的关系还需要进一步的阐述。我们认为存在这种差异可

能与是否采用原代脂肪细胞以及脂肪细胞这类有关。目前看来

IGFBP3对原代棕色脂肪有着特异性的作用。另外,BMP7与

图5脂肪细胞促进肾癌细胞脂质贮存TGFp同属同一超家族，因此在通路下游可能存在交叉，而研

Fig.5 Adipocytes increased the contents of lipid droplets in cancer cell

究表明BMP7与棕色脂肪细胞的分化密切相关'Notes: Data were expressed as mean ± SD, *

尸<0.05; adipo presented

adipocytes; ov presented overexpression..-V*ov+ adipocti.l+ adipoovCtrlBC0.5-10.4.786-0 ov+adipo

786-Oadipo

I0.3.78e〇ov

0.2786*00.0day图6脂肪细胞能够促进肾癌细胞的增殖和侵袭Fig.6 Adipocytes promoted proliferation and migration capacity of renal carcinoma cell

Notes: Data were expressed as mean

土 SD，*

尸<0.05; adipo presented adipocytes; ov presented 3是一种高亲和力的蛋白，越来越多的研究着眼于

IGFBP3影响周围的肿瘤微环境。通过分析标本中IGFBP3的

IGFBP3的IGF非依赖性作用，特别是在肿瘤中所发挥的作用。

表达，我们明确了肾癌细胞中会出现IGFBP3生成增加的现

肝癌中，IGFBP3启动子是甲基化的，如诱导IGFBP3的表达会

象。在体外，将脂肪细胞与肾癌细胞共培养后，脂肪细胞受肾癌

引起细胞的生长抑制，同样的现象也发现在乳腺癌、黑色素瘤、 细胞影响，棕色脂肪相关标志物Prdml6、UCPl明显升高，这种

卵巢癌和前列腺癌[25]。除此之外JGFBP3还与某些癌基因相

效应在加人IGFBP3中和抗体后收到抑制。由此可知,IGFBP3

关，研究发现IGFBP3能够激活SPHK,因此有人猜想IGFBP3

以旁分泌的方式影响脂肪细胞的分化。而在标本中我们同样发

可能与酪氨酸激酶通路相关，事实证明在乳腺癌细胞中IGF-

现，与非肿瘤组、远端脂肪组比较时，肿瘤组织周围的脂肪组织

BP3和EGFR确实都是高表达的网。IGFBP3对肾细胞癌的影

UCP1明显表达增力卩,且具有显著性差异(/><0.001)。响，目前认为IGFBP3可能促进其的生长，而且这种作用与

与脂肪分化相关的通路有Wnt通路、Hedgehog通路、

TGF-(3信号通路有关而我们认为高表达IGFBP3的肾癌

IGF/insulin通路和TGF-p通路有研究发现在肥胖的人

细胞不仅仅能通过自分泌影响肿瘤生长，同时可能通过分泌和小鼠模型中，TGFp的表达增加，同时发现TGFP-SMAD3通

现物医学 Progress in Modern Biomedicine VoL21 NO*3 FEB«2021• 413 •路对于多功能干细胞分化为脂肪细胞有促进作用。另外，由于

SMAD3的表达增加使得白色脂肪细胞的棕色脂肪标志物表达

增加，说明该通路可能还与白色脂肪转化为棕色脂肪有关[31]。

通过检测TGFp下游通路，我们发现IGFBP3能够激活

smadl/5/8、p38MAPK，从而促进脂肪细胞分化。ccRCC本身与脂肪细胞有着重要的联系。肥胖是其明确危

险因素，甚至有研究发现即使是儿童时期或是青年时期的超

重、肥胖也会成为之后肾细胞癌的重要风险因素132]。在肾细胞

[11] Quail DF, Dannenberg AJ. The obese adipose tissue microenviron­ment in cancer development and progression [J]. Nat Rev Endocrinol,

2019, 15(3): 139-154[12] Choi J, Cha YJ, Koo JS. Adipocyte biology in breast cancer: From

silent bystander to active facilitator [J]. Prog Lipid Res, 2018, 69:

11-20[13] Johansson M, Carreras-Torres R, Scelo G, et al. The influence of obe­sity-related factors in the etiology of renal cell carcinoma-A

癌几种病理类型中，肥胖是能够增加ccRCC发生风险的一种

因素[33]。本次研究表明，成熟的脂肪细胞能够促进肾癌细胞的

增殖，并可增强其侵袭力，但其具体机制尚未阐明。值得注意的

是，过表达IGFBP3的786-0细胞与脂肪细胞共培养后的培养

液能够使786-0细胞脂质贮存增加，可能与脂肪细胞的参与有

关。脂滴是一种独特的多功能细胞器。在ccRCC中，除了与能

量代谢相关外，脂滴对细胞应激有着重要的保护作用，包括维

持内质网稳态、清除氧自由基和肿瘤耐药[34]。因此脂肪细胞促

进肿瘤进展可能与引起肾癌细胞脂代谢紊乱有关，有待进一步

研究。综上所述，本次研究表明IGFBP3是肾透明细胞癌中过度

表达的蛋白，脂肪细胞作为IGFBP3的靶器官，IGFBP3能够促

进其分化，其机制主要通过激活TGFp通路中的smadl/5/8、

P38MAPK。成熟的脂肪细胞能够促进肾癌细胞质脂滴形成，并

且促进肿瘤的增殖、提高肿瘤的侵袭性。通过IGFBP3将背细

胞癌与肾周脂肪联系在了一起，为未来肾细胞癌的诊疗提供了

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